ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種常用的免疫分析技術(shù)，用于檢測(cè)和定量樣本中的特定蛋白質(zhì)、肽或抗原。在進(jìn)行ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能會(huì)遇到一些問題，以下是常見問題和注意事項(xiàng)：
常見問題：
高背景值：原因可能包括試劑污染、洗滌不充分、板子質(zhì)量不佳或板子未正確封閉。
信號(hào)弱或不一致：可能是由于樣本或試劑的稀釋不當(dāng)、試劑過期、實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)或試劑批次差異。
標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性：可能是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤、試劑問題或操作過程中的誤差。
孔間差異大：可能是由于加樣不準(zhǔn)確、混合不均勻或板子未充分振蕩。
假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果：可能是由于交叉反應(yīng)、試劑污染或樣本處理不當(dāng)。
注意事項(xiàng)：
試劑準(zhǔn)備：
確保所有試劑在使用前都恢復(fù)到室溫。試劑應(yīng)充分混合，避免沉淀。
樣本處理：
樣本應(yīng)適當(dāng)稀釋，避免過高濃度導(dǎo)致的非特異性結(jié)合。樣本應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下保存，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)操作：
加樣時(shí)使用多道移液器，確保加樣準(zhǔn)確無誤。
避免液體濺出或交叉污染。在每個(gè)步驟之間徹底洗滌板子，以減少非特異性結(jié)合。
洗滌步驟：
使用洗滌緩沖液充分洗滌板孔，避免殘留的洗滌劑或蛋白質(zhì)干擾結(jié)果。
確保洗滌液完全瀝干。
孵育條件：
遵循試劑盒推薦的孵育溫度和時(shí)間。使用封板膜或鋁箔覆蓋板子，避免蒸發(fā)和污染。
底物和終止：
在加入底物后，按照推薦的時(shí)間進(jìn)行反應(yīng)，避免過短或過長(zhǎng)的孵育時(shí)間。使用推薦的終止液及時(shí)終止反應(yīng)。
讀板：
使用適當(dāng)?shù)淖x板器，并在推薦的波長(zhǎng)下讀取吸光度。確保讀板器校準(zhǔn)準(zhǔn)確。
質(zhì)量控制：
包括陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的有效性。定期檢查試劑的有效性和批次一致性。
記錄和重復(fù)：
記錄所有實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果，以便于分析和重復(fù)實(shí)驗(yàn)。為了確保結(jié)果的可靠性，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)