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用ELISA試劑盒檢測(cè)豬延胡索酸的方法與步驟
發(fā)表時(shí)間:2023-04-21
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))是一種常用的生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)、抗體、細(xì)胞因子等生物分子。以下是用ELISA試劑盒檢測(cè)豬延胡索酸的一般方法和步驟:
1.樣品準(zhǔn)備:將待測(cè)樣品收集并處理,如切碎、研磨、提取等操作,以得到可用于檢測(cè)的樣品。
2.操作前準(zhǔn)備:將試劑盒中的試劑和樣品室溫恢復(fù)至室溫,準(zhǔn)備洗滌緩沖液、稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品等。
3.標(biāo)準(zhǔn)品制備:將試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品按要求加入不同濃度的稀釋液中,以制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.試板預(yù)處理:將試板中的孔洗滌2-3次,以去除殘留液體,避免后續(xù)操作的誤差。
5.添加標(biāo)準(zhǔn)品:將標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的濃度和體積,如50μl。
6.添加待測(cè)樣品:將處理好的樣品加入樣品孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的樣品體積,如50μl。
7.加入酶標(biāo)記抗體:將酶標(biāo)記抗體加入每個(gè)孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的抗體體積,如50μl。
8.孔洗滌:在每個(gè)孔中加入洗滌緩沖液,并將孔洗滌3-5次,以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
9.加入底物:在每個(gè)孔中加入底物,使底物與酶標(biāo)記結(jié)合的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng),并形成顏色。
10.反應(yīng)停止:在一定時(shí)間后,加入停止液,停止反應(yīng),并停止顏色的發(fā)展。
11.檢測(cè):用酶標(biāo)儀讀取每個(gè)孔的吸光度,將結(jié)果轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的豬延胡索酸濃度。
以上是一般ELISA檢測(cè)方法和步驟,具體操作可參照試劑盒說(shuō)明書(shū)和相關(guān)文獻(xiàn)。同時(shí),需要注意實(shí)驗(yàn)操作中的衛(wèi)生安全、試劑儲(chǔ)存和使用等方面的注意事項(xiàng),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
1.樣品準(zhǔn)備:將待測(cè)樣品收集并處理,如切碎、研磨、提取等操作,以得到可用于檢測(cè)的樣品。
2.操作前準(zhǔn)備:將試劑盒中的試劑和樣品室溫恢復(fù)至室溫,準(zhǔn)備洗滌緩沖液、稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品等。
3.標(biāo)準(zhǔn)品制備:將試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品按要求加入不同濃度的稀釋液中,以制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.試板預(yù)處理:將試板中的孔洗滌2-3次,以去除殘留液體,避免后續(xù)操作的誤差。
5.添加標(biāo)準(zhǔn)品:將標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的濃度和體積,如50μl。
6.添加待測(cè)樣品:將處理好的樣品加入樣品孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的樣品體積,如50μl。
7.加入酶標(biāo)記抗體:將酶標(biāo)記抗體加入每個(gè)孔中,每個(gè)孔加入相應(yīng)的抗體體積,如50μl。
8.孔洗滌:在每個(gè)孔中加入洗滌緩沖液,并將孔洗滌3-5次,以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
9.加入底物:在每個(gè)孔中加入底物,使底物與酶標(biāo)記結(jié)合的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng),并形成顏色。
10.反應(yīng)停止:在一定時(shí)間后,加入停止液,停止反應(yīng),并停止顏色的發(fā)展。
11.檢測(cè):用酶標(biāo)儀讀取每個(gè)孔的吸光度,將結(jié)果轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的豬延胡索酸濃度。
以上是一般ELISA檢測(cè)方法和步驟,具體操作可參照試劑盒說(shuō)明書(shū)和相關(guān)文獻(xiàn)。同時(shí),需要注意實(shí)驗(yàn)操作中的衛(wèi)生安全、試劑儲(chǔ)存和使用等方面的注意事項(xiàng),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。