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技術(shù)文章
ELISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項(xiàng)
ELISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項(xiàng)
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。
在檢測時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
1. 要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
2. 冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。
3. 標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測。
4. 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
5. 血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70℃以下。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。
在檢測時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
1. 要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
2. 冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。
3. 標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測。
4. 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
5. 血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70℃以下。
