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注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

硝態(tài)氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)橄鯌B(tài)氮。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關(guān)系到作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。

測定原理

在濃酸條件下，NO₃^-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態(tài)氮含量 。

自備實驗用品及儀器

蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、振蕩儀。

試劑組成和配制

試劑一：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每支加1mL濃硫酸充分溶解。

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

樣本處理

按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g新鮮土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取1h，25℃，10000g 離心10min，取上清待測。

測定操作表

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.633x-0.0397，R²=0.9997

NO₃^-—N 含量（mg/kg）=（△A+0.0397）÷ 0.633×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

=79.78×（△A+0.0397）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，0.202mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.004mL；V 樣總：加

入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3165x-0.0397，R²=0.9997

NO₃^-—N（mg/kg）=（△A+0.0397）÷ 0.3165×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

=159.6×（△A+0.0397）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，0.202mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.004mL；V 樣總：加

入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項

1. 硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內(nèi)部移動，所以測定此指標(biāo)時應(yīng)注意采樣深度一致。

2. 土壤經(jīng)風(fēng)干或者烘干很容易引起 NO₃^-—N 的變化，所以 采用新鮮土壤進(jìn)行測定，以準(zhǔn)確反映該指標(biāo)含量。

3. 試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

4. 試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護(hù)措施。

5. 最di檢出限為 62.7μg/kg。