- 品牌:瑞清
- 產(chǎn)地:深圳
- 型號:100管/96樣
- 貨號:RQ-S1812
- 發(fā)布日期: 2023-08-23
- 更新日期: 2024-11-04
產(chǎn)地 | 深圳 |
保存條件 | |
品牌 | 瑞清 |
貨號 | RQ-S1812 |
用途 | |
檢測方法 | 微量法 |
保質(zhì)期 | |
適應(yīng)物種 | |
檢測限 | |
數(shù)量 | 100 |
包裝規(guī)格 | 100管/96樣 |
標(biāo)記物 | |
樣本 | |
應(yīng)用 | 僅供科研使用 |
是否進(jìn)口 | 否 |
測定意義:
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其最適pH范圍,分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。
測定原理:
堿性環(huán)境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。用前加100mL蒸餾水充分溶解。
試劑三:液體×1瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加576μL無水乙醇(自備),24μL蒸餾水充分溶解。(變褐色后不能再使用)
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1瓶,0.5μmol/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
催化反應(yīng):
稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g,加入0.05mL甲苯(自備),輕搖15min;加0.4 mL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,開始計時,催化反應(yīng)24h;到時后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應(yīng)。10000rpm室溫離心10min,取上清液置于冰上待測。
顯色反應(yīng):
1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到660nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL蒸餾水,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管:微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL上清液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
S-ALP活性計算:
活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放1μmol酚。
S-AKP/ALP(U/g土樣)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×V總÷W÷T
= 0.725×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/L;V總:催化體系總體積,1.45mL;W:土壤樣品質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,24 h=1 d。