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深圳瑞清生物信息科技有限公司
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產(chǎn)品展廳
土壤中性磷-酸酶(S-NP)活性測(cè)定試劑盒
  • 品牌:瑞清
  • 產(chǎn)地:深圳
  • 型號(hào):100管/96樣
  • 貨號(hào):RQ-S1811
  • 發(fā)布日期: 2023-08-23
  • 更新日期: 2024-11-04
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 深圳
保存條件
品牌 瑞清
貨號(hào) RQ-S1811
用途 用于科研實(shí)驗(yàn)使用
檢測(cè)方法 微量法
保質(zhì)期
適應(yīng)物種
檢測(cè)限
數(shù)量
包裝規(guī)格 100管/96樣
標(biāo)記物
樣本
應(yīng)用 僅供科研使用
是否進(jìn)口

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

土壤磷酸酶是催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。磷酸酶活性受到土壤碳、氮

含量、有效磷含量和pH的顯著影響,根據(jù)最適PH范圍,一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類型。

測(cè)定原理:

中性環(huán)境中,S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過(guò)測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出NP活性。

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。 用前加100mL蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 576μL 無(wú)水乙醇(自備),24μL 蒸餾水充分溶解。(變褐色后不能再使用)

標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1 瓶,0.5 μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

催化反應(yīng):

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g,加入50μL甲苯(自備),輕搖 15min;加400μL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,開始計(jì)時(shí),催化反應(yīng)24h;到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應(yīng)。8000g,25℃離心10min,取上清液置于冰上待測(cè)。

顯色反應(yīng):

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL蒸餾水,20μL試劑三,4μL試劑四,充

分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A 空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液,20μL試劑三,4μL試劑四,充

分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL上清液,20μL試劑三,4μL試劑四,充

分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫 25℃ 30min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

 

S-NP 活性計(jì)算:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為1個(gè)酶活單位。

S-NP(nmol/d/g)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V總÷W÷T= 725×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

b.使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為1個(gè)酶活單位。

S-NP(nmol/d/g)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V 總÷W÷T= 725×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

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