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菌種的培養(yǎng):

1.菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下, 經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一-定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)-步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25^ 28C培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%" 20%。

保存方法:

傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量。覆蓋保存法:該法較前一-種方法 保存菌種的時間更長,產(chǎn)品僅用于科研適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法:

①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注

意避免水分的蒸發(fā)。

②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或shi鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法:

1.低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃) :低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ 5mm的珠來吸附菌液,然后把珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

2.干冰保存法(-70℃左右) :即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

3.液氮保存法(-196℃) :是適用范圍最廣的微生物保存法。

保藏方法:

1傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿剌培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4-6°C冰箱內(nèi)保存。.

2.覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌, 一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。

3.載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4.寄主保藏法.

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,如立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)并傳代,此法相當(dāng)于-般微生物的傳 代培養(yǎng)保藏法。.等微生 物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5.冷凍保藏法

可分低溫冰箱(-20-30℃, -50-80℃) 、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃和液氮(-196°C)等保藏法。

6.冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華帶來的損害。