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特點(diǎn)優(yōu)勢:

1.所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)自建底大效據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢制,特異性均達(dá)到。

2.重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性強(qiáng)。

3.靈敏性:讀系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。

4.檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

該系列試制盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)證,憑借公同擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試制盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌樣的保守性驗(yàn)征及40余種近緣準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

組成及配制

1、酶標(biāo)板:-塊(96孔)

2、標(biāo)準(zhǔn)品 (凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5m1,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)

反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L, 然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不 要少于0.3m1 )200 U/L的 上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0. 3m1樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酵與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶錯(cuò)式反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本, PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。

樣本采集、存放及運(yùn)輸:

1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次)。

3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

使用方法:

注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書。陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))

取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣(樣本處理區(qū))

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

注意事項(xiàng):

1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。

3. 電泳檢測時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。

5. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。