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PCR試劑盒產品優(yōu)勢:

1.隨時可用。

2.優(yōu)化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。

3.高靈敏度,特異性和可靠性。

4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料

技術原理:

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。

注意事項:

1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。

3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

使用方法:

注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書。陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。

2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))

取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。

2.加樣(樣本處理區(qū))

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。

樣本采集、存放及運輸:

1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次)。

3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

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