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特點優(yōu)勢:

1.所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)自建底大效據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢制,特異性均達到。

2.重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性強。

3.靈敏性:讀系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。

4.檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。

5.序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

該系列試制盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗證,憑借公同擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試制盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌樣的保守性驗征及40余種近緣準菌株和臨床菌株的特異性驗證確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。

組成及配制

1、酶標板:-塊(96孔)

2、標準品 (凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5m1,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時

反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L, 然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不 要少于0.3m1 )200 U/L的 上述標準品加入含有0. 3m1樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

技術原理:

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酵與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶錯式反應實驗中發(fā)現(xiàn)。DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本, PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。

樣本采集、存放及運輸:

1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次)。

3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

使用方法:

注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書。陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。

2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))

取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣(樣本處理區(qū))

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

注意事項:

1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。

3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。