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檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗ti一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被5α還原酶(5AR)抗ti的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗ti,經(jīng)過(guò)溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5α還原酶(5AR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

酶標(biāo)儀(450nm)

高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶wan全溶解后再使用。

實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣ben稀釋ye40μL;空白孔不加。

除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗ti100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑盒性能

準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

靈敏度:最di檢測(cè)濃度小于0.1 U/mL。

特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

有效期:6個(gè)月

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

訂購(gòu)說(shuō)明:

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