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檢測原理

試劑盒采用雙抗ti一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被5α還原酶(5AR)抗ti的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗ti,經過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5α還原酶(5AR)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

酶標儀(450nm)

高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

37℃恒溫箱

操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?，F(xiàn)象,水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。

實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣ben稀釋ye40μL;空白孔不加。

除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗ti100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒性能

準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。

靈敏度:最di檢測濃度小于0.1 U/mL。

特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于15%。

貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

有效期:6個月

免責聲明

試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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