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Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類(HEV)病du IgM抗tiELISA檢測。

產品特點

一、高效、靈敏、特異的抗ti;

二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;

五、節(jié)省實驗經費。

組成結構

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿:EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

自備材料

1.蒸餾水。

2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.振蕩器及磁力攪拌器等。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣ben稀釋ye40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后,為保證檢測效果,需要根據說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明,試劑盒大多是在2~8°C條件下儲存

2. 在實驗進行前,請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致,再進行后續(xù)操作

3. 溶解標準品過程中,注意標準品是否受潮,過程中要避免產生泡沫

4. 為了避免交叉污染,配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時,正確使用封板膠紙可保證結果的準確性

6. 正確洗板有助于實驗結果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應為無色,請避光保存。加入孔板后,將由無色變成不同程度的藍色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致,加入終止液,溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果出現綠色,即表明終止液與底物未混勻,請充分混合

1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

5.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

6.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有du。實驗完成后應立即讀取OD值。

11.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

免責聲明

1.  試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2.  嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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